文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 主要试剂

    1.1.2 主要仪器

1.2 方法

    1.2.1 阳性细胞的制备

    1.2.2 hTERT在细胞中的表达情况检测

    1.2.3 端粒酶活性检测

    1.2.4 细胞周期检测

    1.2.5 端粒酶修饰后细胞转录组测序分析

    1.2.6 数据统计分析

    1.2.7 RT-qPCR数据分析

2 结果

2.1 细胞转染效率及目的基因表达检测

2.2 阳性细胞端粒酶活性检测

2.3 细胞周期

2.4 端粒酶修饰后的供体细胞基因表达模式分析

    2.4.1 端粒酶修饰与未修饰的供体细胞差异基因表达分析

    2.4.2 差异表达基因功能分析

    2.4.3 RT-qPCR验证RNA-Seq数据

3 讨论

文章摘要:为探究供体细胞的端粒酶修饰对细胞重编程的可能分子机制,利用腺病毒载体Ad-Max构建端粒酶基因hTERT的重组腺病毒,通过不同病毒滴度（MOI）感染乳腺上皮细胞筛选阳性细胞模型,并对制备的细胞模型进行相关生物学检测;其次构建hTERT过表达转录组文库,进一步分析端粒酶修饰后的牛乳腺上皮细胞体外模型的差异表达基因与重编程之间的关系。结果表明,当MOI为80时,获得细胞模型转染效率最佳;用RNA-seq构建的端粒酶过表达mRNA文库,发现有740个下调基因,有250个上调基因;GO富集分析显示,差异基因主要与细胞、组织、器官及个体发育进程有关,进一步KEGG通路分析显示差异基因主要参与调控乳腺上皮细胞多种生物学功能及细胞发育,且能够激活PI3K-AKT及Wnt信号通路。因此,初步证实端粒酶修饰的供体细胞对细胞重编程趋于有利的调控作用。

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